يحتل التحليل اللوني السائل عالي الأداء (HPLC) والتحليل اللوني للغاز (GC) مكانة مهمة في التحليل الكروماتوغرافي وهما أكثر الطرق التحليلية استخدامًا في ممارسة تحليل الأدوية لدينا. وهي ذات أهمية كبيرة لتحديد محتوى الدواء وفحص المواد ذات الصلة. اليوم، سنواصل معرفة المزيد عن HPLC ونأمل أن يكون مفيدًا لك.
ما هو اللوني السائل عالي الأداء؟
HPLC هي تقنية تحليلية تفصل أو تحدد أو تحدد كمية كل مكون من مكونات الخليط. بعبارات بسيطة، HPLC هي طريقة كروماتوغرافية لفصل العينات وتحديدها.
يتكون نظام HPLC عمومًا من مضخة التسريب، وحاقن، وعمود، وكاشف، ووحدة تسجيل البيانات ومعالجتها. تعتبر مضخة التسريب والعمود والكاشف هي المكونات الرئيسية.
المصطلحات الشائعة المستخدمة في نظام HPLC
القرار: نسبة الفرق بين وقت الاحتفاظ بقمتين متجاورتين إلى متوسط عرض الذروة. يُطلق عليه أيضًا القرار، وهو يشير إلى درجة الانفصال بين قمتين متجاورتين.
عامل التتبع: معلمة تقوم بتقييم شكل الذروة عن طريق حساب نسبة عرض الذروة عند ارتفاع الذروة بنسبة 5% إلى المسافة من قمة القمة إلى الحافة الأمامية. والغرض من ذلك هو ضمان تأثير الفصل الكروماتوغرافي ودقة القياس، ويستخدم عادة للإشارة إلى T.
الإشارة إلى الضوضاء: نسبة الإشارة إلى الضوضاء في التحليل اللوني السائل. وهو مؤشر مهم لقياس أداء الكروماتوغرافيا السائلة ويستخدم لتقييم دقة وحساسية الجهاز في فصل العينات وكشفها.
تشير المساحة/الارتفاع إلى حجم المنطقة أو ارتفاع القمم في التحليل اللوني السائل، والذي يمكن أن يعكس المحتوى والتركيز النسبي للمكونات في العينة، وهو شائع الاستخدام في التحليل الكمي.
الصفائح: تعرف أيضًا باسم كفاءة العمود، وهي إحدى معلمات العمود الكروماتوغرافي. يستخدم للتعبير عدديا عن فعالية الفصل للعمود الكروماتوغرافي.
وقت الاستبقاء: يسمى الفاصل الزمني من بداية حقن العينة إلى القمة الكروماتوغرافية للمكون بوقت الاحتفاظ بالمكون. أي من الحقن إلى الفاصل الزمني بعد العمود عندما يبدو تركيز المكون كبيرًا. يشيع استخدامها في التحديد النوعي.
t: يُطلق على وقت الاحتفاظ بالمكون بمعامل القسم 0 اسم الوقت الميت. عادة ما يعتبر الهواء أو الميثان مكونات ويستخدمان لتحديد الوقت الميت.
كيف يعمل HPLC؟
ملخص بسيط: الطور المتحرك ← المضخة ← الحاقن ← العمود ← الكاشف ← أسطوانة النفايات
البعض منكم غير متأكد من اتجاه اتصال العمود في نظام HPLC مختلف (ترتيب الوحدات في الجهاز ليس ثابتًا دائمًا).
عادةً ما تكون عملية التدفق بأكملها ثابتة: أولاً، يتم استخراج الطور المتحرك من قارورة الطور المتحرك بواسطة مضخة التسريب عالية الضغط ويدخل إلى نظام الحقن. في هذا النظام، تتم إضافة العينة إلى مسار التدفق عن طريق تبديل صمام سداسي الاتجاه. عند هذه النقطة يتم فصل العينة وتحليلها بواسطة العمود ويتم إرسال نظام الكشف اللاحق في الوقت الفعلي إلى البرنامج لتحديد ملفات تعريف البيانات.
نظام التسريب
تعد مضخة التسريب واحدة من أهم أجزاء نظام HPLC، وتتكون بشكل أساسي من جهاز تخزين السوائل، والمرشح، وجهاز تفريغ الغاز، ومضخة التسريب عالية الضغط.
جهاز تخزين السائل: يجب اختيار المذيب من الدرجة الكروماتوغرافية؛
الفلتر: يجب تصفية الطور المتحرك مسبقًا بواسطة غشاء 0.45 ميكرون قبل الدخول إلى النظام لتجنب انسداد العمود، وخاصة الملح المنظم المحضر بملح غير عضوي؛
جهاز تفريغ الغاز: يتم تفريغ الطور المتحرك عن طريق التسخين أو الشفط أو امتصاص الهيليوم لإزالة فقاعات الهواء. يمنع الفقاعات المنطلقة عندما يتدفق الطور المتحرك خارج عمود الضغط العالي من دخول الكاشف والتسبب في زيادة حادة في الضوضاء، مما يؤثر على الكشف؛
مضخة التسريب عالية الضغط: يؤثر أدائها بشكل مباشر على موثوقية نتائج التحليل. حاول اختيار مضخة التسريب ذات الضغط السلس والنبض المنخفض.
* يتم تصنيف مضخات التسريب بناءً على أوضاع تشغيلها إلى مضخات هوائية ومضخات ميكانيكية. في عملية التحليل اليومية، غالبًا ما نستخدم المضخة الهوائية في المضخة الثنائية والمضخة الرباعية. تتمتع المضخات الثنائية بدقة خلط أعلى ونسبة أكثر دقة لخلط الطور المتحرك. المضخات الرباعية أكثر اقتصادا.
نظام أخذ العينات
العينات: حاليًا، يتم استخدام صمام الحقن السداسي وجهاز أخذ العينات التلقائي بشكل أكثر شيوعًا في أنظمة HPLC. لديها ختم جيد وحجم صغير.
ينقسم صمام الحقن سداسي الاتجاهات إلى الطريق الرئيسي والطريق الالتفافي، والذي يحتاج عادةً إلى التبديل إلى الطريق الالتفافي عن طريق أخذ العينات الكمية للحلقة الكمية ثم قطعه مرة أخرى إلى الطريق الرئيسي بواسطة الطور المتحرك لتعزيز العينات التي تم الحصول عليها في الالتفافية إلى النظام، لاستكمال أخذ العينات.
يتوافق الشكل الأيسر مع حالة الاستعداد للتجاوز في نظام hplc؛ المقابلة للرقم الصحيح هي حالة الحقن.
يشكل الطور المتحرك والعمود حلقة مغلقة؛ يتم حقن العينة من المدخل وتدخل الحلقة الكمية، ويتم تفريغ الفائض في دلو النفايات السائلة.
بعد دخول العينة بشكل كامل، قم بتغيير وصلة الصمام السداسي. حاليًا، يتم توصيل الطور المتحرك بالحلقة الكمية، ويقوم الطور المتحرك بدفع العينة إلى العمود.
في هذا الوقت، يغير الصمام السداسي وضع الاتصال مرة أخرى ويعود إلى الحالة الأولية، ويتم فصل العينة المراد اختبارها والكشف عنها عن طريق شطف الطور المتحرك.
رسم تخطيطي لمبدأ بناء صمام المدخل سداسي الاتجاهات
نظام الفصل
يتضمن نظام الفصل العمود والطور الثابت والطور المتحرك.
هيكل العمود الكروماتوغرافي
العمود الكروماتوغرافي: إنه الجزء الأساسي من نظام الفصل، ويتكون من أنبوب العمود، وغطاء الضغط، والطويق (حلقة الختم)، ولوحة الغربال (الفلتر)، والمفاصل، والبراغي، وما إلى ذلك. لديها الأنواع الرئيسية التالية:
| يكتب | ميزة |
| أعمدة كروماتوغرافية الطور العكسي | الناقل المرتبط بمجموعة غير قطبية، الحشوات شائعة الاستخدام: هلام السيليكا المرتبط بأوكتاديسيلسيلان (عمود C18)، هلام السيليكا المرتبط بأوكتيل سيلان (عمود C8) وهلام السيليكا المرتبط بالفينيل، إلخ. |
| أعمدة المرحلة العادية | أعمدة مملوءة بحشو هلام السيليكا، أو هلام السيليكا المرتبطة بالمجموعات القطبية. |
| أعمدة التبادل الأيوني | أعمدة معبأة بحشوات التبادل الأيوني، مقسمة إلى أعمدة تبادل كاتيونية وأعمدة تبادل أنيونية. |
| أعمدة الفصل اللولبية | أعمدة مليئة بالحشوات اللولبية. |
المعلمات التي تؤثر على أداء فصل العمود:
المعلمات الخاصة: طول القطر الداخلي للعمود، وخصائص الحشو، وحجم الجسيمات وتوزيع حجم الجسيمات، وحجم المسام، ومساحة السطح، وما إلى ذلك.
درجة حرارة العمود: يجب ألا تتجاوز درجة حرارة العمود 60 درجة مئوية. الزيادة في درجة حرارة العمود سوف تؤثر على ذروة الشوائب؛ من الناحية النظرية، كلما ارتفعت درجة حرارة العمود، زادت سرعة ذروة كل مادة، مما يؤدي إلى تحسين كفاءة العمود وزيادة درجة الانفصال.
الرقم الهيدروجيني: عمود هلام السيليكا هيدروكسيل السيليكا المتبقي غير المغلق، يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني للطور المتحرك بشكل عام بين 2 ~ 8؛ تم إغلاق هيدروكسيل السيليكا المتبقي من هلام السيليكا أو هلام السيليكا المركب من البوليمر أو عمود البوليمر، وتكون درجة الحموضة في الطور المتحرك أكبر بشكل عام من 8 أو أقل من 2.
مراحل المحمول ：تُستخدم أنظمة ماء الميثانول ومياه الأسيتونيتريل بشكل شائع في تحليل كروماتوغرافيا الطور العكسي. يُفضل استخدام أنظمة الماء والأسيتونيتريل للكشف عند نهاية الطول الموجي للأشعة فوق البنفسجية. كلما أمكن، لا ينبغي استخدام الأملاح المنظمة في الطور المتحرك، وعندما يتم استخدامها، يجب استخدامها بتركيزات منخفضة.
نظام الكشف
كاشف الأشعة فوق البنفسجية: وهو أحد أجهزة الكشف الأكثر استخدامًا في أنظمة HPLC، فهو يستجيب لمعظم المركبات العضوية.
الخصائص: حساسية عالية. نطاق خطي واسع غير حساسة للتغيرات في معدل التدفق ودرجة حرارة الطور المتحرك؛ يمكن اختيار الطول الموجي، وسهل التشغيل؛
القيود: لا يمكن استخدام المذيبات ذات الامتصاص المعين للأشعة فوق البنفسجية كمرحلة متنقلة، ولا يمكن أن يكون الطول الموجي التشغيلي لكاشف الامتصاص أصغر من الطول الموجي المقطوع للمذيب.
على وجه التحديد، يمكن تقسيمها إلى كاشفات VWD وDAD
كاشفات مجموعة الثنائي الضوئي
كاشف الانكسار التفاضلي:
كاشف عالمي قائم على التركيز في نظام HPLC يستجيب لجميع المواد المذابة؛
الخصائص: حساسية منخفضة، حساسة لدرجة الحرارة، لا يمكن استخدامها لشطف التدرج؛
كاشف الإسفار: الكاشف الأكثر حساسية وانتقائية للغاية، يمكن أن يصل الحد الأدنى لتركيز الكشف إلى 0.1ng/ml، وهو مناسب لتحليل التتبع، ولكن النطاق الخطي ليس واسعًا مثل كاشف الأشعة فوق البنفسجية، ويمكنه اكتشاف المركبات التي يمكن أن تنتج مضانًا.
مقارنة HPLC وGC
موضوع التحليل
GC: ينطبق على العينات التي يمكن تغويزها، مع ثبات حراري جيد ونقطة غليان منخفضة، وهو ما يمثل 20% من المواد العضوية
HPLC: ينطبق على العينات التي يمكن تحويلها إلى محلول بعد الذوبان. يمكن الكشف عن العينات ذات الوزن الجزيئي العالي، وصعوبة التغويز، وضعف الاستقرار الحراري، وارتفاع نقطة الغليان.
المرحلة المتنقلة
GC: الطور المتحرك خامل، مع عدم وجود تفاعل بين المكونات والطور المتحرك؛ ينقل الطور المتحرك العينة فقط خلال الطور الثابت، ولا تتفاعل المكونات إلا مع الطور الثابت.
HPLC: الطور المتحرك سائل، والطور المتحرك ومكونات التفاعل بين مشاركة وتأثير الفصل الكروماتوغرافي لتحسين الظروف الكروماتوغرافية وتحسين الفصل يقدم فكرة جديدة.
ظروف التشغيل
جي سي: عملية التدفئة
HPLC: درجة حرارة الغرفة (درجة حرارة العمود بشكل عام لا تزيد عن 60 درجة مئوية)، الضغط العالي
حساسية
حساسية الكشف عن الطور الغازي أكبر من حساسية الطور السائل
نطاق التطبيق
نطاق تطبيق الطور السائل أكبر بكثير من الطور السائل
مقارنة بين HPLC المرحلة العادية وHPLC المرحلة المعكوسة
النوعان الأكثر شيوعًا من HPLC هما HPLC ذو الطور العادي وHPLC ذو الطور العكسي.
المرحلة العادية HPLC
تمتلئ أعمدة HPLC بجزيئات السيليكا الدقيقة والمذيبات القطبية مثل الهكسان.
يبلغ قطر الأعمدة النموذجية 4.6 ملم أو أقل ويبلغ طولها من 150 إلى 250 ملم.
سوف تمر المركبات غير القطبية الموجودة في الخليط عبر العمود بسرعة أكبر.
تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء ذو المرحلة العكسية
عمود HPLC له نفس الحجم. يمتلئ العمود بجزيئات السيليكا المعدلة لجعلها غير قطبية.
استخدام مذيب قطبي مثل خليط الماء والكحول مثل الميثانول. سوف تمر المركبات القطبية الموجودة في الخليط عبر العمود بشكل أسرع بسبب التجاذب القوي بين المذيب القطبي والجزيئات القطبية.
HPLC ذو الطور المعكوس هو الشكل الأكثر استخدامًا من HPLC.
ملاحظة حول استخدام الأعمدة الكروماتوغرافية السائلة عالية الأداء
تطابق نوع رأس العمود السائل عالي الأداء والمفاصل الشعرية المصنوعة من الفولاذ المقاوم للصدأ: إذا لم تتطابق المفاصل وعمق رأس العمود، فسيكون هناك تسرب للسائل أو سيكون الحجم الميت كبيرًا جدًا.
المطابقة عند التبديل بين المذيبات المختلفة
إذا كان المذيب المخزن في العمود والمذيب المخزن في نظام الأجهزة لا يتطابقان مع الطور المتحرك، فيجب تبديلهما قبل الاستخدام.
خاصة عندما يحتوي الطور المتحرك على أملاح عازلة، مثل حفظ المذيب طور عضوي نقي أو نسبة عالية من الطور العضوي، فإذا تم توصيله مباشرة بالعمود الكروماتوغرافي، فإنه سيؤدي إلى ترسيب بلورات الأملاح العازلة في العمود، و حتى يؤدي إلى العمود الجديد من الضرر الدائم الذي لا يمكن إصلاحه.
موازنة وتقادم الأعمدة الجديدة قبل الاستخدام.
نطاق الرقم الهيدروجيني
بشكل عام، نطاق الأس الهيدروجيني للأعمدة الكروماتوغرافية هو 2-8.
تخزين عمود HPLC
الطور المتحرك المستخدم للتخزين قصير المدى لمدة 1-2 يوم هو الأفضل بدون أملاح عازلة.
يوصى عمومًا بالميثانول النقي أو الأسيتونتريل فقط للتخزين طويل الأمد لأعمدة الطور المعكوس، أو يعد تخزين الطور العضوي بنسبة 80٪ أيضًا خيارًا جيدًا وكافيًا لتجنب نمو البكتيريا.
تعتبر الأعمدة المعتمدة على السيانيد غير مستقرة في المذيبات القطبية العضوية ومناسبة للتخزين البارد في الطور المائي.
درجة حرارة التشغيل القصوى هي 60 درجة مئوية، ودرجة الحرارة المثلى أقل من 40 درجة مئوية.
عند فصل المواد القلوية، يجب أن تكون قيمة الرقم الهيدروجيني للطور المتحرك المستخدمة أعلى من PKA المُقاس بوحدة واحدة
تطبيقات HPLC
لقد تطور HPLC إلى طريقة قابلة للتطبيق عالميًا، وبالتالي يمكن استخدامه في جميع مجالات الكيمياء والكيمياء الحيوية والمستحضرات الصيدلانية تقريبًا.
التحليل في المجال الصيدلاني
فحص البوليمرات الاصطناعية
تحديد الملوثات في التحليل البيئي
الكمي للأدوية في المصفوفات البيولوجية
استخراج المنتجات القيمة
ضمان ومراقبة الجودة للمنتجات الصناعية والمواد الكيميائية الدقيقة
تنقية وعزل الجزيئات الحيوية مثل الإنزيمات أو الأحماض النووية
معالجة المياه لأغراض التنقية
تركيز المكونات النزرة قبل التحليل
تقنية كروماتوغرافية تتضمن تبادل الروابط
فصل البروتين عن طريق كروماتوجرافيا التبادل الأيوني
كروماتوغرافيا التبادل الأنيوني عالي الأس الهيدروجيني للكربوهيدرات والسكريات قليلة التعدد
دليل استكشاف أخطاء HPLC وإصلاحها
اللوني السائل عالي الأداء (HPLC)، باعتباره أداة متطورة للغاية، عرضة للعديد من المشكلات الصعبة والبسيطة إذا لم يتم تشغيله بشكل صحيح أثناء الاستخدام. المشاكل الأكثر شيوعًا هي ضغط العمود، والانجراف، والشذوذ الذروة. لذلك، كيف يمكنك حل المشكلة بسرعة عند مواجهة جهاز كروماتوجرافي معيب؟
الضغط المفرط
تعتبر الزيادة المفاجئة في الضغط هي المشكلة الأكثر شيوعًا في استخدام HPLC، وذلك للأسباب التالية بشكل عام:
| الأسباب | الحلول |
| انسداد في مسار التدفق | افصل مدخل مضخة التفريغ بحيث يكون أنبوب النظرة الخاطفة أسفل زجاجة المذيب وانظر ما إذا كان السائل يقطر بحرية. يتم انسداد رأس مرشح المذيبات إذا لم يقطر السائل أو يقطر ببطء. | انقعه في حمض النيتريك 30٪ لمدة نصف ساعة ثم اشطفه بالماء عالي النقاوة. إذا كان السائل يقطر بحرية، فإن رأس مرشح المذيبات يكون طبيعيًا. |
| افتح صمام التطهير حتى لا يمر الطور المتحرك عبر العمود؛ إذا لم ينخفض الضغط بشكل ملحوظ، فإن الرأس الأبيض للمرشح مسدود. | إزالة الرؤوس البيضاء مرشح ويصوتن مع كحول الأيزوبروبيل 10٪ لمدة نصف ساعة. يكون رأس الفلتر الأبيض طبيعيًا إذا انخفض الضغط إلى أقل من 100 رطل لكل بوصة مربعة. تحقق مرة أخرى. |
| قم بإزالة نهاية مخرج العمود؛ إذا لم ينخفض الضغط، يتم انسداد العمود. | إذا كان الملح العازل مسدودًا، اغسله بماء بنسبة 95% حتى يصبح الضغط طبيعيًا.
|
| إعداد معدل التدفق غير صحيح | إعادة تعيين لتصحيح معدل التدفق. |
| نسبة الطور المتحرك غير صحيحة | استبدله بمذيب أقل لزوجة أو نسبة إعادة ضبط. |
| ضغط النظام الانجراف نقطة الصفر | ضبط نقطة الصفر لمستشعر الضغط. |
ضغط منخفض جدًا
| الأسباب | الحلول |
| تسريبات النظام | البحث عن الوصلات المختلفة وخاصة في نهايات الأعمدة وسد التسربات. |
| الهواء في المضخة | الآن غالبًا ما يكون الضغط غير مستقر ومرتفع ومنخفض. والأكثر خطورة سوف يتسبب في عدم امتصاص المضخة للسائل. افتح صمام التطهير، واتدفق بمعدل تدفق يتراوح من 3 إلى 5 مل/دقيقة؛ إذا لم يكن الأمر كذلك، استخدم حقنة خاصة لامتصاص فقاعات الهواء بالقوة الخارجية في صمام الإخلاء. |
| لا يوجد تدفق خارج المرحلة المتنقلة | تحقق مما إذا كان هناك طور متحرك في زجاجة الخزان، وما إذا كان الغطاس مغمورًا في الطور المتحرك وما إذا كانت المضخة تعمل. |
| الصمام المرجعي غير مغلق | أغلق الصمام المرجعي بعد تقليل معدل التدفق. بشكل عام، قلل إلى 0.1~0.2 مل/دقيقة ثم أغلق الصمام المرجعي. |
الانجراف الأساسي
| الأسباب | الحلول |
| تقلب درجة حرارة العمود | تأكد من عدم وجود نوافذ مفتوحة أو مكيفات هواء موجهة إلى حجرة درجة حرارة العمود |
| خلية التدفق ملوثة أو غازية | اغسل خلية التدفق بالميثانول أو أي مذيب قطبي قوي آخر (ويفضل أن يكون ذلك مع فصل العمود). إذا لزم الأمر، استخدم حمض النيتريك 1N (لا تستخدم حمض الهيدروكلوريك). |
| طاقة مصباح الأشعة فوق البنفسجية غير كافية | استبدله بمصباح UV جديد |
الضوضاء الأساسية
| الأسباب | الحلول |
| مصباح الديوتيريوم يستخدم لفترة طويلة جدًا | يجب استبدال مصباح الديوتيريوم في الوقت المناسب |
| الضوضاء الأساسية (العادية) | الهواء في الطور المتحرك أو الكاشف أو المضخة. | مطلوب تفريغ الطور المتحرك قبل الحقن الرسمي؛ اغسل النظام لإزالة الهواء من الكاشف أو المضخة. |
| تسرب | تحقق من عدم وجود تركيبات خطية مفكوكة، وتسربات في المضخة، وتساقط الأملاح، وضوضاء غير عادية، واستبدل أختام المضخة إذا لزم الأمر |
| خلط غير كامل للطور المتحرك | قم برجه يدويًا لخلط المذيبات جيدًا أو استخدم مذيبات منخفضة اللزوجة لتقليل التباين أو إضافة مبادل حراري. |
| درجة حرارة العمود مرتفعة جدًا | تقليل معدل التدفق. ضبط تكوين المذيبات من الطور المتحرك |
| الالكترونيات الأخرى على نفس الخط | افصل الأجهزة الإلكترونية الأخرى المسببة للتداخل |
| اهتزاز المضخة | أضف مخمد النبض إلى النظام إذا كانت المضخة تهتز |
| الضوضاء الأساسية (غير منتظمة) | تسرب السائل | تحقق من عدم وجود تركيبات فضفاضة، وتسربات في المضخة، وتساقط الأملاح والضوضاء غير العادية. |
| الطور المتحرك ملوث أو متدهور أو مكون من مذيبات منخفضة الجودة. | التحقق من تكوين الطور المتحرك |
| المذيبات في الطور المتحرك ليست قابلة للامتزاج | حدد الطور المتحرك القابل للذوبان بشكل متبادل |
| تلوث خلية التدفق | تنظيف خلية التدفق بحمض النيتريك |
| فقاعات الهواء في النظام | تنظيف النظام بمحلول قطبي قوي |
| الطاقة غير كافية في مصباح الكاشف | تغيير المصباح |
| تعبئة العمود مفقودة أو مسدودة | استبدال العمود |
| الخلط غير المتكافئ للطور المتحرك | إصلاح أو استبدال الخلاط |
شذوذ نمط الذروة
| الأسباب | الحلول |
| لا توجد قمم في اللوني | لا تتم تغذية النظام أو يتم تقسيم العينة؛ لم يتم ضخ المضخة أو تم استخدام الطور المتحرك بشكل غير صحيح؛ لم يتم ضبط الكاشف بشكل صحيح؛ |
| واحدة أو عدة قمم سلبية | خلفية امتصاص عالية للطور المتحرك؛ يتم إدخال الهواء أثناء الحقن. امتصاص مكونات العينة أقل من امتصاص الطور المتحرك |
| جميع القمم سلبية | كابل الإشارة معكوس أو عكس قطبية خرج الكاشف؛ البصريات غير متوازنة بعد. |
| جميع القمم واسعة | النظام ليس في حالة توازن. المذيب الذي يذيب العينة له قطبية أقل بكثير من الطور المتحرك؛ الاختيار غير الصحيح لحجم العمود ونوعه؛ العمود أو عمود الحماية ملوث أو انخفضت كفاءته؛ تأثير التغيرات في درجات الحرارة. |
| قمم أصغر من المتوقع | لزوجة العينة عالية جدًا؛ خطأ في حقن العينة أو خطأ في حجم الحقن؛ إعداد كاشف غير صحيح. حجم غير صحيح لحلقة المعايرة؛ تلوث خلية الكشف. مشاكل مع مصباح الكاشف. |
| قمم مزدوجة أو قمم الكتف | حجم الحقن كبير جدًا؛ تركيز العينة مرتفع جداً؛ عمود الحماية أو رأس العمود مسدود؛ عكاز الحماية أو العمود ملوث أو فاشل؛ ينهار العمود أو يشكل قناة قصيرة. |
قمم ما قبل التمديد
| ارتفاع حجم الحقن أو تركيز العينة، والمذيب الذي يذيب العينة يكون أكثر قطبية من الطور المتحرك؛ تلوث أو فشل عمود الحماية أو العمود الكروماتوجرافي.
انخفاض درجة حرارة العمود: زيادة درجة حرارة العمود؛
الاختيار غير المناسب لعينة المذيب: استخدم الطور المتحرك كمذيب للعينة؛
التحميل الزائد للعينة: تقليل محتوى العينة؛
العمود التالف: استبدل العمود |
| قمم زائدة | 1. التحميل الزائد على العمود: تقليل حجم العينة؛
2. زيادة قطر العمود باستخدام مرحلة ثابتة ذات حجم أعلى؛
3. تدخل الذروة، وتنظيف وتصفية العينة؛ ضبط المرحلة المتنقلة.
4. هيدروكسيل السيليكون، إضافة ثلاثي إيثيل أمين، تخميل العمود مع القلويات يزيد من تركيز المخزن المؤقت أو الملح يقلل من درجة الحموضة في الطور المتحرك؛
5. حجم ميت أو حجم كبير جدًا خارج العمود، قم بتقليل نقطة الاتصال؛
6. استخدم أنابيب توصيل ذات قطر داخلي رفيع إن أمكن؛
7. انخفاض كفاءة العمود، استبدال العمود؛ |
| قمم مسطحة | إعدادات الكاشف غير صحيحة؛ حجم الحقن كبير جدًا أو تركيز العينة مرتفع جدًا |
| القمم المتبقية | 1. الوقت الكافي لموازنة النظام وتنظيفه بعد تغذية كل عينة؛
2. وجود أشياء مجهولة في العينة، وتحسين المعالجة المسبقة للعينة؛
3. تلوث الطور المتحرك، واستبداله بمرحلة متنقلة جديدة، واستخدامه الآن إن أمكن، وتصفية الطور المتحرك الليلي عند استخدامه مرة أخرى؛
4. فقاعات الهواء الصغيرة في مسار التدفق، افتح صمام التطهير وقم بزيادة معدل التدفق للتخلص منها. |
| تشعب الذروة |
إذا كان عمود الحماية أو العمود التحليلي ملوثًا، قم بإزالة عمود الحماية وإجراء إعادة التحليل. إذا لزم الأمر، استبدل عمود الحماية. عينة مذيب غير قابل للذوبان في مذيب عينة الطور المتحرك، إذا أمكن، استخدم الطور المتحرك كعينة مذيب. |
| تشويه الذروة | التحميل الزائد للعينة، تقليل حجم العينة. |
| تشويه الذروة المبكر | 1. الاختيار غير المناسب لمذيب العينة
2. تقليل حجم العينة
3. استخدام مذيبات العينات ذات القطبية المنخفضة |
| المخلفات العالية للقمم المبكرة | 1. تأثيرات خارج العمود
2. ضبط اتصالات النظام (باستخدام أنابيب معرف أقصر وأصغر)
3. استخدام أحجام خلايا التدفق الصغيرة |
| قمم إضافية | 1. المكونات الأخرى في العينة: ظاهرة طبيعية؛
2. قمم الشطف من الحقن السابق: زيادة وقت التشغيل أو انحدار التدرج؛ زيادة معدل التدفق.
3. قمم فارغة أو شبحية: تأكد من أن الطور المتحرك نقي؛ استخدام الطور المتحرك كمذيب العينة؛ تقليل حجم الحقن. |
خاتمة
اللوني للغاز مناسب لحوالي 20% من المركبات العضوية المحددة، في حين أن اللوني السائل عالي الأداء (HPLC) مطلوب لتحليل الـ 80% المتبقية. يتمتع HPLC بمزايا فعالية الفصل العالية والسرعة التحليلية العالية وحساسية الكشف الجيدة. إنه قادر على تحليل وفصل المواد النشطة فسيولوجيًا غير المستقرة حرارياً ذات نقاط الغليان العالية التي لا يمكن تحويلها إلى غاز. في الوقت الحاضر، أصبحت تقنية الفصل والتحليل لنظام HPLC هي التقنية المفضلة للتجارب ذات الصلة في مجالات الطب والمختبرات والصناعة.
العربية
